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dc.contributor.advisorSánchez Martínez, Cristina
dc.contributor.authorSarrasín Ortiz, María
dc.date.accessioned2021-08-30T12:18:30Z
dc.date.available2021-08-30T12:18:30Z
dc.date.issued2021
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10641/2414
dc.description.abstractLos vectores virales constituyen el sistema de transferencia de material genético más empleado en terapia génica en la actualidad (1). Concretamente, los virus adeno-asociados recombinantes (rAAVs) son uno de los vectores más prometedores por su alta seguridad, debido a la ausencia de patogenicidad y bajo perfil inmunogénico en humanos (2). Sin embargo, en los ensayos clínicos de terapia génica se han identificado limitaciones en cuanto a su eficacia debido, principalmente, al bajo tropismo y a la neutralización por anticuerpos. Recientemente se ha descrito una estrategia de optimización de rAAVs, que combina la manipulación genética con la unión química de oligonucleótidos en sitios específicos de la cápside viral (3). Nosotros proponemos utilizar este sistema para la incorporación de aptámeros de unión a receptores celulares, en busca de un tropismo selectivo. En concreto, buscamos incorporar un aptámero frente al receptor TLR4 (ApTLR#4F) sobreexpresado en procesos inflamatorios y cáncer (4,5). Para ello, es necesario producir rAAVs que incorporan un animoácido no natural de manera sitio-específica y, posteriormente unir mediante reacción química o “click chemistry” el aptámero. Nuestro primer objetivo fue la optimización del sistema de producción de rAAVs mutantes mediante transfección transitoria libre de virus helper. Realizamos producciones a baja escala de rAAVs modificados y wild-type, y evaluamos su capacidad de transducción. Los resultados confirmaron la generación de rAAVs que incorporaban aminoácidos no naturales en proteínas de la cápside (VPs), sin embargo, la eficiencia de producción de vectores funcionales fue muy baja. Posteriormente, realizamos una producción a gran escala y tras una purificación parcial de partículas virales mediante diafiltración, analizamos la generación de vectores funcionales, así como de partículas virales vacías y con genoma. Como resultado, detectamos la expresión de proteínas de movilidad electroforética acorde con VPs virales y partículas virales génicas, tanto en las fracciones del virus purificado como del mutante. Además, detectemos una mínima disminución en la producción de virus mutantes, de no más de tres veces, en comparación con el virus wild-type. Sin embargo, la funcionalidad del virus mutante disminuyó drásticamente con respecto al wild-type quedando por determinar si esta pérdida de funcionalidad puede ser revertida mediante la incorporación del aptámero a través de reacción química.spa
dc.language.isospaspa
dc.rightsAtribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/*
dc.subjectVector adeno-asociadospa
dc.subjectTerapia génicaspa
dc.subjectAptámerospa
dc.subjectIngeniería de cápsidesspa
dc.titleProducción de Vectores Adeno-Asociados Modificados para la Incorporación de Aptámeros.spa
dc.typebachelor thesisspa
dc.type.hasVersionSMURspa
dc.rights.accessRightsopen accessspa
dc.description.extent2377 KBspa


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