Grande, EnriqueSibai, MustafaGrases, DanielaAndrada, ElenaReig, OscarEscobosa, MarcAzueta, AinaraCastellano, DanielPuente, JavierMartínez de Villarreal, JaimeFont, AlbertAlonso-Gordoa, TeresaBenítez, RaquelMoreno-Oya, AneÁlvarez-Maestro, MarioBurgos, JavierCliment, M. AngelDomínguez, MarioGalván, PatriciaGalante, IsabelGarcía, Juan F.Perez, ElenaGarcía del Muro, XavierGuerrero-Ramos, FélixMarqués, MiriamMaroto, PabloParamio, Jesús M.Pinto, AlvaroPrat, AleixMalats, NúriaDurán, IgnacioPorta-Pardo, EduardReal, Francisco X.2026-09-282026-09-282026-07-21Grande, E, Sibai, M, Grases, D, Andrada, E, Reig, O, Escobosa, M, Azueta, A, Castellano, D, Puente, J, Martínez de Villarreal, J, Font, A, Alonso-Gordoa, T, Benítez, R, Moreno-Oya, A, Álvarez-Maestro, M, Burgos, J, Climent, M A, Domínguez, M, Galván, P, Galante, I, García, J F, Perez, E, García del Muro, X, Guerrero-Ramos, F, Marqués, M, Maroto, P, Paramio, J M, Pinto, A, Prat, A, Malats, N, Durán, I, Porta-Pardo, E & Real, F X 2026, 'Spatial architecture contributes to failure of bulk biomarker-guided neoadjuvant immunotherapy selection in bladder cancer : The DUTRENEO study', Cell Reports Medicine, vol. 7, no. 7, 102878. https://doi.org/10.1016/j.xcrm.2026.1028782666-3791PubMedCentral: PMC13400163https://hdl.handle.net/10641/8338Publisher Copyright: © 2026 The Authors. Published by Elsevier Inc. This is an open access article under the CC BY-NC license. http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/Los biomarcadores predictivos para los inhibidores de puntos de control inmunitarios (ICIs) se identifican en gran medida de forma retrospectiva, pero su utilidad clínica prospectiva sigue sin demostrarse. Aquí, informamos DUTRENEO, un ensayo prospectivo aleatorizado de fase 2 que prueba si una firma de inflamación tumoral masiva (TIS) validada retrospectivamente de 18 genes puede guiar la terapia con ICI neoadyuvante en el cáncer de vejiga invasor del músculo. El ensayo no cumple su objetivo primario, y esto demuestra que la estratificación de la expresión génica masiva no enriquece suficientemente a los respondedores. Para definir la biología subyacente a este fracaso, generamos perfiles transcriptómicos espaciales de células individuales de 377 genes en ∼5,4 millones de células en grandes áreas tisulares. La respuesta está gobernada por arquitecturas espaciales invisibles para los ensayos masivos, incluida la proximidad de las células T CD8+ a las células cancerosas, la coexpresión localizada de puntos de control dentro de vecindarios epiteliales ricos en cáncer y comunidades excluidas del sistema inmunitario ricas en fibroblastos en los no respondedores. Proporcionamos un marco cuantitativo que muestra que ≥77 genes y regiones de diámetro tisular ≥3 mm preservan la señal espacial predictiva a un rendimiento escalable. Los detalles del registro del ensayo son EudraCT 2017-002246-68. [Traducción automática al español; idioma original: inglés.]Predictive biomarkers for immune checkpoint inhibitors (ICIs) are largely identified retrospectively, but their prospective clinical utility remains unproven. Here, we report DUTRENEO, a prospective randomized phase 2 trial testing whether a retrospectively validated 18-gene bulk tumor inflammation signature (TIS) can guide neoadjuvant ICI therapy in muscle-invasive bladder cancer. The trial does not meet its primary endpoint, and this demonstrates that bulk gene-expression stratification does not sufficiently enrich for responders. To define the biology underlying this failure, we generate single-cell spatial transcriptomic profiles of 377 genes in ∼5.4 million cells across large tissue areas. Response is governed by spatial architectures invisible to bulk assays, including CD8+ T cell proximity to cancer cells, localized checkpoint co-expression within epithelial cancer-rich neighborhoods, and fibroblast-rich immune-excluded communities in non-responders. We provide a quantitative framework showing that ≥77 genes and ≥3-mm tissue diameter regions preserve predictive spatial signal at scalable throughput. The registration details of the trial are EudraCT 2017-002246-68.2313975377enghttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/PDL1biomarkerbladder cancercisplatinimmune checkpoint inhibitorsmulti-omicsneoadjuvant therapypatient stratificationrandomized trialspatial transcriptomicsGeneral MedicineGeneral Biochemistry, Genetics and Molecular BiologySDG 3 - Good Health and Well-beingYesjournal articleopen access10.1016/j.xcrm.2026.102878https://www.scopus.com/pages/publications/105044998221https://www.scopus.com/pages/publications/105044998221#tab=citedBy