Ibarra-Meneses, Ana VictoriaFernández, LauraSan Martín, Juan VíctorGarcía-Martínez, JesúsBotana, LauraSánchez, CarmenSolana, Jose CarlosBernardo, LorenaReed, Steven G.Coler, Rhea N.Moreno, JavierCarrillo, Eugenia2026-01-092026-01-092025-12Ibarra-Meneses, A V, Fernández, L, San Martín, J V, García-Martínez, J, Botana, L, Sánchez, C, Solana, J C, Bernardo, L, Reed, S G, Coler, R N, Moreno, J & Carrillo, E 2025, 'Diagnostic potential of GLP recombinant antigens in whole blood assays for Leishmania infantum infection', Parasites and Vectors, vol. 18, no. 1, 475. https://doi.org/10.1186/s13071-025-07108-z1756-3305PubMedCentral: PMC12639648https://hdl.handle.net/10641/7088Publisher Copyright: © The Author(s) 2025.Antecedentes: El ensayo de estimulación en sangre total (WBA) es una herramienta valiosa para detectar la infección asintomática por Leishmania y monitorizar el tratamiento de la leishmaniasis visceral (LV). Este estudio buscó identificar proteínas recombinantes específicas para sustituir al antígeno soluble de Leishmania inespecífico en este ensayo, lo que podría resultar útil para desarrollar una prueba diagnóstica estandarizada que cumpla con las buenas prácticas de fabricación. Métodos: Empleando un ensayo de linfoproliferación celular, evaluamos aquí el comportamiento de 11 antígenos recombinantes en 61 sujetos que habían sido tratados con éxito o se habían recuperado espontáneamente de una infección por Leishmania infantum. A continuación, seleccionamos aquellos antígenos que mostraban diferencias significativas en los índices de estimulación de células inmunitarias y en la secreción de citocinas entre un grupo respondedor y otro no respondedor, respectivamente, en función de si presentaban o no una respuesta celular frente a L. infantum. Los tres mejores antígenos candidatos, ΔCpB, NSC y ENSC, se emplearon después en un WBA realizado en sangre periférica de 53 sujetos estratificados según el estado de leishmaniasis [LV curada, leishmaniasis cutánea (LC) curada, leishmaniasis asintomática (AS) y controles sanos]. Resultados: Se comprobó que ENSC era el antígeno más eficaz para detectar la LV curada mediante la medición de la producción específica de IP-10 (90% de reconocimiento), y que el TNF inducido por ΔCpB era el más eficaz para detectar la LC curada (71,4% de reconocimiento). Aunque las citocinas IL-2 e IP-10 inducidas por NSC y ENSC fueron capaces de detectar la AS, esta capacidad fue solo moderada (60%). Conclusiones: Proponemos que, una vez validados en estudios de mayor tamaño, estos antígenos de Leishmania GLP podrían contribuir a mejorar la precisión del seguimiento del tratamiento y del diagnóstico de curación. [Traducción automática al español; idioma original: inglés.]Background: The whole blood stimulation assay (WBA) is a valuable tool for detecting asymptomatic Leishmania infection and monitoring the treatment of visceral leishmaniasis (VL). This study sought to identify specific recombinant proteins to replace the nonspecific soluble Leishmania antigen in this assay, which could be useful for developing a standardized diagnostic test that complies with good manufacturing practice. Methods: Employing a cell lymphoproliferative assay, we here assessed the behaviour of 11 recombinant antigens in 61 subjects who had either been successfully treated for or had spontaneously recovered from Leishmania infantum infection. We then selected those antigens showing significant differences in immune cell stimulation indices and cytokine secretion between a responder and non-responder group, respectively, showing a cellular response to L. infantum or not. The three best candidate antigens, ΔCpB, NSC and ENSC, were then used in a WBA conducted on peripheral blood from 53 subjects stratified according to leishmaniasis status [cured VL, cured cutaneous leishmaniasis (CL), asymptomatic leishmaniasis (AS) and healthy controls]. Results: ENSC was found to be the most effective antigen to detect cured VL by measuring specific IP-10 production (90% recognition) and TNF induced by ΔCpB to detect cured CL (71.4% recognition). Although the cytokines IL-2 and IP-10 elicited by NSC and ENSC were able to detect AS, this capacity was only moderate (60%). Conclusions: We propose that, once validated in larger studies, these GLP Leishmania antigens might help improve the accuracy of treatment monitoring and diagnosing cure.1347536enghttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/Cellular responseLeishmaniaRecombinant antigensWhole blood assayParasitologyGeneral VeterinaryInfectious DiseasesSDG 3 - Good Health and Well-beingJournal ArticleYesyesjournal articleopen access10.1186/s13071-025-07108-zhttps://www.scopus.com/pages/publications/105022625097https://www.scopus.com/pages/publications/105022625097#tab=citedBy