Cariaga-Martínez, ArielGutierrez, Kilian JesúsRegidor, IgnacioDel Álamo, MartaSaiz-Ruiz, JerónimoAlelú-Paz, Raúl2025-12-192025-12-192025-06Cariaga-Martínez, A, Gutierrez, K J, Regidor, I, Del Álamo, M, Saiz-Ruiz, J & Alelú-Paz, R 2025, 'A Refined Approach to Isolate Interneurons for High-Validity Epigenetic Studies in Human Brain Tissue', Methods and Protocols, vol. 8, no. 3, 61. https://doi.org/10.3390/mps80300612409-9279PubMedCentral: PMC12196513unpaywall: 10.3390/mps8030061https://hdl.handle.net/10641/6840Publisher Copyright: © 2025 by the authors.La investigación epigenética ha experimentado notables avances en los últimos años; sin embargo, nuestra capacidad para explorar el cerebro humano a nivel celular sigue siendo limitada. Uno de los principales obstáculos ha sido la dificultad de aislar poblaciones neuronales específicas a partir de tejido postmortem, en particular las interneuronas, que desempeñan un papel central en numerosos trastornos psiquiátricos. En este estudio presentamos un protocolo práctico y reproducible para aislar interneuronas GAD-positivas a partir de muestras de cerebro humano. Aislamos estructuras similares a células permeabilizadas adecuadas para el análisis epigenético posterior. Para garantizar la especificidad, validamos las células aisladas comparándolas con interneuronas derivadas de iPSC humanas. Este enfoque permite obtener ADN de alta calidad apto para el análisis epigenético posterior, incluida la PCR específica de metilación. Al dirigirse a un subtipo neuronal bien definido, nuestro método proporciona una base sólida para estudiar los cambios moleculares asociados a trastornos como la esquizofrenia y el autismo. Este protocolo abre nuevas vías para investigaciones específicas de tipo celular en tejido cerebral, un avance en la comprensión de cómo los mecanismos epigenéticos contribuyen a la fisiopatología neuropsiquiátrica. [Traducción automática al español; idioma original: inglés.]Epigenetic research has made notable progress in recent years, yet our ability to explore the human brain at a cellular level remains limited. One of the main obstacles has been the difficulty of isolating specific neuronal populations from postmortem tissue—particularly interneurons, which play a central role in many psychiatric disorders. In this study, we present a practical and reproducible protocol for isolating GAD-positive interneurons from human brain samples. We isolate permeabilized cell-like structures suitable for downstream epigenetic analysis. To ensure specificity, we validated the isolated cells by comparing them with interneurons derived from human iPSCs. This approach allows for high-quality DNA extraction suitable for downstream epigenetic analysis, including methylation-specific PCR. By targeting a well-defined neuronal subtype, our method provides a solid foundation for studying the molecular changes associated with disorders such as schizophrenia and autism. This protocol opens new doors for cell-specific investigations in brain tissue, a step forward in understanding how epigenetic mechanisms contribute to neuropsychiatric pathophysiology.5242079enghttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/brain epigeneticscortical interneuronshuman brain tissueneuronal isolationBiotechnologyStructural BiologyBiochemistry, Genetics and Molecular Biology (miscellaneous)Journal ArticleYesyesjournal articleopen access10.3390/mps8030061https://www.scopus.com/pages/publications/105009290947https://www.scopus.com/pages/publications/105009290947#tab=citedBy