FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES

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Producción de Vectores Adeno-Asociados Modificados para la Incorporación de Aptámeros.
(2021) Sarrasín Ortiz, María; Sánchez Martínez, Cristina
Los vectores virales constituyen el sistema de transferencia de material genético más empleado en terapia génica en la actualidad (1). Concretamente, los virus adeno-asociados recombinantes (rAAVs) son uno de los vectores más prometedores por su alta seguridad, debido a la ausencia de patogenicidad y bajo perfil inmunogénico en humanos (2). Sin embargo, en los ensayos clínicos de terapia génica se han identificado limitaciones en cuanto a su eficacia debido, principalmente, al bajo tropismo y a la neutralización por anticuerpos. Recientemente se ha descrito una estrategia de optimización de rAAVs, que combina la manipulación genética con la unión química de oligonucleótidos en sitios específicos de la cápside viral (3). Nosotros proponemos utilizar este sistema para la incorporación de aptámeros de unión a receptores celulares, en busca de un tropismo selectivo. En concreto, buscamos incorporar un aptámero frente al receptor TLR4 (ApTLR#4F) sobreexpresado en procesos inflamatorios y cáncer (4,5). Para ello, es necesario producir rAAVs que incorporan un animoácido no natural de manera sitio-específica y, posteriormente unir mediante reacción química o “click chemistry” el aptámero. Nuestro primer objetivo fue la optimización del sistema de producción de rAAVs mutantes mediante transfección transitoria libre de virus helper. Realizamos producciones a baja escala de rAAVs modificados y wild-type, y evaluamos su capacidad de transducción. Los resultados confirmaron la generación de rAAVs que incorporaban aminoácidos no naturales en proteínas de la cápside (VPs), sin embargo, la eficiencia de producción de vectores funcionales fue muy baja. Posteriormente, realizamos una producción a gran escala y tras una purificación parcial de partículas virales mediante diafiltración, analizamos la generación de vectores funcionales, así como de partículas virales vacías y con genoma. Como resultado, detectamos la expresión de proteínas de movilidad electroforética acorde con VPs virales y partículas virales génicas, tanto en las fracciones del virus purificado como del mutante. Además, detectemos una mínima disminución en la producción de virus mutantes, de no más de tres veces, en comparación con el virus wild-type. Sin embargo, la funcionalidad del virus mutante disminuyó drásticamente con respecto al wild-type quedando por determinar si esta pérdida de funcionalidad puede ser revertida mediante la incorporación del aptámero a través de reacción química.
Aplicación de Roadmap como herramienta de apoyo comercial en el proyecto MUNAT.
(2021) Ribagorda Muñoz, María; Galán Antoñanzas, Javier
Los días más fértiles del ciclo menstrual de la mujer se corresponden con aquellos en los que se observa el fenómeno de Ferning, que produce un patrón de cristalización de la saliva en forma de hojas de helecho al observarse por el microscopio. Por otra parte, existen biomarcadores para estimar estos días a través de la medición de la temperatura basal corporal (TBC). El aumento de la TBC se produce los días posteriores a los días fértiles del ciclo femenino. Debido a esto, ambos parámetros pueden emplearse para calcular los días en los que la concepción es más probable. MUNAT es un dispositivo médico predictor de fertilidad que, con un 97-98% de precisión, ofrece datos de forma automática y a tiempo real a través de la medición del patrón de cristalización de la saliva y de la TBC. Fue diseñado por el Dr. Jorge Rivera, profesor investigador del área de Ingeniería de la Universidad Anáhuac Mayab, y fue incubado en el parque TecniA. El parque tecnológico TecniA alberga el ecosistema empresarial más importante del sureste mexicano y en él interaccionan empresas, organismos del sector público y varias instituciones académicas, con el propósito de crear investigación, desarrollo y nuevas empresas y servicios. Una de las universidades aliadas es la Universidad Anáhuac Mayab, en la que TecniA fomenta el espíritu emprendedor entre los estudiantes. Retomar el proyecto de comercialización del dispositivo MUNAT, utilizando como plan de apoyo un Roadmap de comercialización, permitirá solucionar parte de la problemática social en torno al aborto, dificultad para concebir, falta de acceso a anticonceptivos y embarazos no deseados, que afecta de forma trascendente a la población mexicana. En este trabajo se han utilizado como herramientas Business Model Canvas como primer paso para establecer el modelo de negocio, así como un estudio de mercado con el fin de definir los competidores actuales. Por medio de entrevistas y encuestas a personal sanitario y a mujeres en edad fértil, se ha estudiado la factibilidad de MUNAT como producto y su oportunidad en el mercado. En líneas generales, es posible afirmar que el nicho de mercado para MUNAT se encuentra en mujeres de entre 16 y 45 años, aunque aquellas menores de 29 usarían el dispositivo para prevenir un embarazo, al contrario que aquellas mayores de 30 años. Además, la realización del Roadmap de comercialización ha permitido establecer un plan de desarrollo que pone de manifiesto los riesgos relacionados con la salida al mercado, la economía del canal, el posicionamiento competitivo, la adopción de la cadena del proyecto, las estrategias de financiación, la propiedad intelectual, los pasos de ejecución, la co-innovación y los vehículos de comercialización. Asimismo, la herramienta de apoyo comercial Roadmap ha permitido la realización de una serie de recomendaciones para paliar estos riesgos. De esta forma, se recomienda una campaña de marketing personalizada a cada sector de mercado en función de las preferencias de uso, así como un precio de lanzamiento adaptado a una población con recursos medios/bajos, dado que en este sector se identificó una mayor necesidad. Asimismo, por este motivo, sería aconsejable un desarrollo tecnológico que muestre los datos de fertilidad directamente a través del dispositivo, en lugar de requerirse un teléfono móvil en el que instalar la aplicación. Por último, la creación de una “Comunidad MUNAT”, a través de la cual se ofrezca información acerca de planificación familiar y sexual, sería un aspecto favorable, atractivo y útil para todas las partes implicadas.
Protección del ayuno ante los efectos tóxicos generados por la doxorrubicina.
(2021) Morató Nieto, Lucas; Barradas, Marta; Fernández Marcos, Pablo J.; Plaza, Adrián
El ayuno es una intervención nutricional que consiste en la privación de la ingesta de alimentos durante un periodo de tiempo superior a 10-12 horas. Lo primero que sucede durante el ayuno es una bajada de glucemia e insulinemia. Esto activa la glucogenólisis, proceso caracterizado por la liberación de glucosa a partir del glucógeno almacenado, en hígado y en músculo. A continuación, se da la producción de glucosa a partir de precursores no glucídicos (gluconeogénesis). Cuando estos procesos no consiguen mantener la glucemia, se activa la lipólisis, caracterizada por la liberación de ácidos grasos al torrente sanguíneo, los cuales se utilizan en el hígado formando los cuerpos cetónicos. Para poder estudiar los efectos beneficiosos del ayuno realizamos tres experimentos. Primero, una cinética de la variación de la glucemia, cetonemia y peso corporal durante el ayuno. Donde obtuvimos una visión temporal del proceso, pudiendo compararla con las similitudes de la cinética en los humanos. En segundo lugar, comprobamos las variaciones que provoca el ayuno en la expresión génica de las células polinucleadas de sangre periférica (PBMCs). Por último, estudiamos si el ayuno presenta un efecto protector frente a los efectos adversos de la doxorrubicina. Para ello realizamos dos experimentos: primero, se hizo una cinética con la variación del peso entre los ratones ayunados y los ratones control, para ver si los efectos adversos de la quimioterapia disminuían con el ayuno; y segundo, estudiamos la variación en los marcadores de toxicidad entre ratones ayunados y controles. Con los resultados obtenidos en la variación de la expresión génica de las PBMCs no podemos concluir que haya una disminución significativa, debido a un fallo experimental. Por otro lado, se ha demostrado que los ratones que han realizado ayuno pierden menos peso frente aquellos que han mantenido una dieta normal durante la administración de doxorrubicina. Lo que significa que el ayuno promueve un efecto protector, aunque solo se observe una disminución significativa en uno de los marcadores de toxicidad del corazón, mientras que en el resto se mantienen constantes. En futuros estudios se quiere estudiar más marcadores de toxicidad para corroborar el efecto de protección.
Localización y caracterización de fusiones de ADN procedentes del mecanismo de Alargamiento Alternativo de Telómeros (ALT).
(2021) Monreal Peinado, Sara; Flores Hernández, Ignacio
Los telómeros son estructuras que protegen el material genético de la pérdida de ADN codificante y de otros procesos de reparación. Cuando una célula se divide pierde parte de la estructura telomérica pudiendo llegar a un punto en el que el proceso de división queda interrumpido al quedar el ADN desprotegido. Por tanto, para hacer a una célula inmortal esta necesita activar mecanismos de mantenimiento de los telómeros (TMM). Existen diferentes TMM, la activación de la telomerasa (TA) y el alargamiento alternativo de los telómeros (ALT). Una característica de las células ALT+ (positivas para el mecanismo ALT) son las roturas generadas en los extremos teloméricos produciéndose ECTRs (Repeticiones teloméricas extracromosómicas). En este trabajo hemos analizado si las ECTRs se fusionan entre sí por mecanismos asociados a procesos de homología o de NHEJ (Non-Homologous End Joining ). Además, hemos estudiado la localización de las ECTRs para su posterior caracterización mediante NGS (Next Generation Sequencing ). Previamente nos cercioramos, mediante la técnica TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol ), que las células ALT+ usadas en este estudio no presentan actividad telomerasa. También comprobamos que estas células presentan una mayor heterogeneidad e intensidad de fluorescencia (longitud telomérica) y una mayor presencia de PML-NBs (Cuerpos nucleares de Leucemia Promielocítica) al compararlas con las células con TA. Por último, localizamos fusiones entre ECTRs usando la técnica SABER-FISH (Signal Amplification By Exchange Reaction and Fluorescent In Situ Hybridization ). La detección de fusiones mostró mayor presencia de ambos tipos de fusiones en células ALT+, estando en mayor proporción las asociadas a homología. En cuanto al aislamiento de estas fusiones, para su posterior caracterización, se obtuvieron niveles muy bajos. En conclusión, las células tumorales ALT+ presentan las características propias de este tipo de TMM, es decir, mayor longitud y heterogeneidad telomérica, ausencia de actividad telomerasa y mayor cantidad de PML-NBs. También se ha visto como las fusiones asociadas a este mecanismo son mayoritarias en células ALT+, lo que concuerda con lo esperado. Por otro lado, el rendimiento adquirido en la extracción del ADN no fue el esperado y por eso se requiere amplificar ese material genético para su posterior secuenciación y caracterización.
Mecanismo de YAP en la regulación de la resistencia a vemurafenib en cáncer colorrectal y melanoma.
(2021) Mazarío Gárgoles, Carmen; Rodríguez García-Rendueles, María Elena
La resistencia terapéutica es un gran reto en el tratamiento del cáncer. La identificación de genes que pueden predecir la respuesta al tratamiento es clave para diseñar una mejor estrategia terapéutica. YAP es un mediador de resistencia a la terapia anticancerígena. Este oncogén es el último efector de la ruta supresora de tumores HIPPO, está relacionado con un peor pronóstico y es inductor de proliferación y metástasis. Se ha demostrado que la resistencia a vemurafenib en cáncer de tiroides, colorrectal y melanoma con la mutación BRAFV600E, se debe a varios mecanismos que convergen en un aumento de la actividad de RAS produciendo una re-activación de ERK. Un mecanismo propuesto en cáncer de tiroides es a través de la activación de la ruta HER2/HER3. El objetivo es investigar el papel de YAP en la resistencia a vemurafenib en tumores colorrectales y de melanoma; bajo la hipótesis de que YAP nuclear confiere resistencia a vemurafenib mediante la activación de HER2/HER3. En resultados previos se vio que el 52% de las líneas celulares de cáncer tiroideo presentaban YAP constitutivamente nuclear. Las líneas con un fenotipo más agresivo presentaban mayor porcentaje de YAP nuclear. En tejidos de tumores humanos, el 65% tienen YAP nuclear, sin embargo, no existen diferencias por genotipo o fenotipo, a excepción de la variante tall cell con enriquecimiento de YAP nuclear. La expresión YAPS127A en células de cáncer tiroideo con YAP citoplasmático, induce un aumento en proliferación, invasión y resistencia a vemurafenib. Esta resistencia se debe a la activación de la ruta de HER2/HER3. En un sistema no isogénico, las líneas celulares con YAP nuclear tienen una mayor expresión de pHER2/pHER3 comparado con las líneas con YAP citoplasmático. En líneas de melanoma y colorrectales con YAP citoplasmático, se observa que la expresión de YAPS127A aumenta proliferación e invasión celular. Esta inducción incrementa la resistencia a vemurafenib en la línea de melanoma mientras que no tiene efecto en las colorrectales. En las células de melanoma, YAPS127A sensibiliza a verteporfina y aumenta la resistencia a vemurafenib, mientras que la combinación disminuye la viabilidad celular de manera más efectiva que de forma individual. En la línea de melanoma, la expresión del mutante produce un incremento de los niveles de mRNA de HER2 (ERBB2). La inducción de ERBB2 por vemurafenib aumenta tras la expresión del mutante. Esto indica que YAP induce resistencia a vemurafenib a través de HER2, lo cual no ocurre en las líneas de cáncer colorrectal. Estos hallazgos indican que líneas de tiroides, melanoma y colorrectales son dependientes de YAP para su viabilidad. Sin embargo, YAP nuclear induce resistencia a vemurafenib únicamente en las líneas de melanoma y tiroides, lo que indicaría un papel de YAP línea-dependiente. Estos resultados muestran a YAP como una posible nueva diana terapéutica para el tratamiento de melanoma y tiroides en combinación con vemurafenib.
3D hepg2 cell-based cell transformation assay.
(2021) Martín Levy, Raquel; Sovadinová, Iva
Monolayer in vitro cultures of hepatic cells, so-called two-dimensional (2D) liver models do not adequately mimic the natural cell microenvironment because of the lack of different biological features and functions such as cell-to-cell and cell-to-matrix interactions. That is why there is a need to develop and improve three-dimensional (3D) hepatic cell (liver) models, characterized by higher expression of liver cell markers and cell interactions, although they still present some limitations and special requirements. This study aims to optimize and adapt 3D HepG2 cell-based transformation assay applicable for biomedicine, carcinogenicity research and toxicology. Within the proposed protocol, HepG2 cells spheroids were first exposed to an initiator (3-methylcholanthrene, 3-MC) followed by the exposure to promotor (12-O-tetradecanoylphorbol-13- acetate, TPA) to create a tumor environment and characterize a new hepatocellular carcinoma in vitro model. The spheroids were monitored within a culture with a non-destructive and non-invasive bright field microscopy-based assay. The analysis is suitable with manual high-speed automated microscopic image acquisition and automated analysis using an in-house built macro 'Spheroid_Finder' in Fiji/ImageJ software. This protocol was essential to characterize and quantify 3D spheroid formation, size and shape. The results show that spheroids treated with solvent controls did not differ from non-treated spheroids in size or shape. Interestingly, the spheroids treated with 3-MC alone and with the combination with TPA were smaller than the control spheroids, and their shape and compactness were also affected. On the other hand, spheroids treated with TPA alone were mildly bigger than the control ones, and their shape and compactness were changed. It should be emphasized that to confirm cell transformation, the gene expression related to neoplastic and hepatocellular carcinoma-derived cell lines phenotypes will be further evaluated with RT-qPCR, as well as spheroids functionality by measuring albumin, urea or lactate in the collected medium. Despite this assay needing further optimization and validation to confirm its potential, we conclude that CTA assay utilizing HepG2 3D spheroids can be a promising tool for screening carcinogenicity potential of chemicals or new anti-cancer in biomedical, pharmacological, and toxicological research.
Caracterización de biomarcadores de respuesta a inmunoterapia en sangre periférica de pacientes de cáncer de pulmón avanzado.
(2021) Martínez Toledo, Cristina; Sánchez-Arévalo Lobo, Víctor
Antecedentes: La inmunoterapia es una opción de tratamiento que está mostrando resultados prometedores en varios tipos de cáncer, entre ellos, el cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP). Actualmente, las terapias anti-PD-1/PD-L1 suponen la primera línea de tratamiento para aquellos pacientes con estadios avanzados o metastásicos. Sin embargo, un porcentaje elevado (≈50%) no obtiene un beneficio clínico, progresando en pocos meses. Por ello, el desarrollo de biomarcadores es necesario para la identificación previa de aquellos pacientes que van a beneficiarse, lo que permitiría redirigir a los pacientes que no se beneficiarían a otras alternativas terapéuticas. Objetivos y Métodos: El objetivo principal es la búsqueda de nuevos biomarcadores de respuesta a inmunoterapia y de mecanismos de progresión en sangre periférica. Para ello, por medio del estudio de cuatro diferentes paneles de anticuerpos dirigidos a diferentes grupos celulares (linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+, linfocitos T exhausted y células mieloides), comparamos las diferencias de estas poblaciones celulares en las muestras de 31 pacientes con CPCNP en estadío IV con progresión de la enfermedad versus 31 pacientes sin progresión tras 1 año de tratamiento con anti-PD1/PD-L1. Resultados: No se encontraron asociaciones entre las variables clínicas analizadas y la progresión. En el aspecto molecular, los análisis de las muestras basales mostraron, para los pacientes con progresión, unos niveles elevados de células supresoras derivadas de mieloides de tipo monocítico (Mo-MDSCs) (p-valor = 0,042), y de linfocitos T CD8+ PD1- con positividad para LAG3 (p = 0,039), las cuales se han asociado en otros estudios con un peor pronóstico. Por otro lado, las muestras postratamiento revelaron diferencias entre los subgrupos de linfocitos T CD4+ reguladores, con los progresados teniendo un mayor número de reguladoras memoria y los no progresados, de reguladoras naive (p = 0,020 y 0,027). Además, también se observó un incremento de células positivas para LAG3 en los pacientes no progresados en los linfocitos T dobles negativos (CD4- CD8-) (p = 0’007). Conclusiones: las Mo-MDSCs y los linfocitos T CD8+ LAG3+ se muestran como un posible futuro biomarcador, accesibles por un método poco invasivo. Su estudio puede, además, ayudar al descubrimiento de nuevos mecanismos moleculares que podrían desencadenar los cambios en los linfocitos T CD4+ reguladores en el caso de Mo-MDSCs.
CD90 como potencial marcador predicitivo para el tratamiento de gliobastoma con dexametasona.
(2021) Franco Ezquerro, Laura; García Álvarez, Isabel; García Romero, Noemí
Los gliomas son los tumores malignos más comunes del sistema nervioso central (SNC). El glioblastoma (GB), o glioma de grado IV, es el más agresivo en adultos, con una mediana de supervivencia de 8 meses si no se sigue un tratamiento. Actualmente, la terapia consiste en cirugía, seguida de radioterapia junto con quimioterapia concomitante y adyuvante, normalmente temozolomida. Antes de la resección tumoral, el fármaco más comúnmente recetado es el agente corticoideo dexametasona, para cesar las cefaleas y el edema cerebral asociado al tumor, dado que inhibe a las prostaglandinas y los leucotrienos, produciendo una respuesta anti-inflamatoria e inmunosupresora. A pesar de los esfuerzos de la comunidad científica, actualmente solo se ha conseguido aumentar la esperanza de vida a 20,9 meses, como consecuencia principalmente de la elevada heterogeneidad intra- e inter-tumoral. Sin embargo, ensayos previos han demostrado que la respuesta clínica a dexametasona mejora en aquellos pacientes con mayor expresión de CD90. Por lo que decidimos estudiar el potencial uso de CD90 como marcador predictivo de respuesta a dexametasona en una cohorte de 24 pacientes con GB y analizar le heterogeneidad del tumor. Mediante PCR cuantitativa a tiempo real e inmunofluorescencia pudimos observar en nuestra cohorte como los respondedores a dexametasona presentan una mayor cantidad de células CD90+. Teniendo en cuenta todo lo expuesto, en un futuro, CD90 podría usarse como marcador predictivo de respuesta, mejorando así la terapia. Sin embargo, se necesitan más estudios que expliquen los mecanismos moleculares implicados en el proceso de angiogénesis en GB así como profundizar en la heterogeneidad del tumor y aumentar el número muestral para minimizar los errores producidos por esta.
Nanotecnología aplicada a la cardioprotección mediante la inhibición de la degradación de matriz extracelular tras un infarto agudo de miocardio.
(2021) Cabrejas Correges, Janire; Zaragoza Sánchez, Carlos; Delgado Martos, María Jesús
El infarto agudo de miocardio (IAM) es la principal causa de muerte en el mundo, por lo que establecer un diagnóstico preciso y encontrar dianas terapéuticas eficaces, resulta de vital importancia. La causa más frecuente que subyace al infarto es la obstrucción de, al menos, una arteria coronaria, que impide un correcto aporte sanguíneo al tejido miocárdico, dando lugar a la isquemia. Esta disminución del flujo sanguíneo, desencadena un evento de necrosis miocárdica en el área infartada, responsable del remodelado cardiaco. El remodelado cardiaco es un proceso fisiológico del desarrollo, aunque también surge de manera adaptativa ante cambios transitorios del entorno para preservar la función cardiaca, que de no resolverse adecuadamente se convierte en un factor determinante en el desarrollo de la insuficiencia cardíaca (IC). Durante el remodelado, se disparan numerosos cambios bioquímicos, y estructurales, con el fin de mantener la función miocárdica y asegurar un correcto bombeo sanguíneo al corazón. Ante la isquemia miocárdica, la respuesta inflamatoria es la primera gran cascada de señalización para minimizar la falta de oxígeno de los tejidos, aunque como parte del proceso, también se lleva a cabo la síntesis de enzimas proteolíticos de componentes de la matriz extracelular: las metaloproteinasas de matriz extracelular (MEC), ya que en la región promotora de sus genes, se localizan elementos de respuesta a factores de transcripción pro-inflamatorios. No sólo eso, sino que además se produce la síntesis de moléculas entre las que en especial para este trabajo de fin de grado, se encuentra CD147, también denominada EMMPRIN (Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer), debido a su actividad como inductor de las metaloproteinasas de matriz extracelular, en concreto MMP-9 y MMP-13, en el miocardio. Posteriormente, tiene lugar una proliferación excesiva de fibroblastos que reemplazan la matriz degradada por una matriz fundamentalmente de colágeno, produciéndose una cicatrización del tejido. El resultado de un desequilibrio en este proceso, es el de la pérdida de contractilidad en una región del corazón, cuya extensión varía en función del grado de necrosis miocárdica. Dada la importancia del remodelado cardiaco en relación con la recuperación de la funcionalidad cardiaca del paciente, es importante definir con exactitud los mecanismos moleculares subyacentes para intentar establecer nuevas dianas que nos permitan un mejor diagnóstico y tratamiento frente a las enfermedades del corazón. Por ello, en el presente trabajo nuestro grupo de investigación, en base a la experiencia del laboratorio propone el uso de la nanotecnología aplicada al control del remodelado cardiaco, como herramienta de cardioprotección frente a los daños posteriores al infarto agudo de miocardio. A partir del uso de nanopartículas conjugadas con péptidos de unión específica a EMMPRIN (AP9), pretendimos actuar sobre su dominio IgI causando su inhibición, y por tanto, reduciendo la liberación y activación de metaloproteasas en el tejido miocárdico tras el infarto, para de esta forma preservar en la medida de lo posible, la mayor cantidad de tejido miocárdico contráctil tras el infarto y por tanto, reducir la insuficiencia cardiaca post-infarto.
Induction, Isolation and Biological function of Excreted/Secreted Products released by entomopathogenic nematode Heterorhabditis bacteriophora.
(2021) Albert Poyán, Paola; Hyršl, Pavel; Eliáš, Sara
Entomopathogenic nematodes (EPNs) are a type of parasitic nematode characterized by the development in insect hosts and symbiotic relationship with specific bacterial species. The EPN Heterorhabditis bacteriophora has a symbiotic association with bacterium Photorhabdus luminesces. During the infection of the host, the EPNs produce a variety of molecules known as Excreted/Secreted Products (ESPs) that have been described with immunomodulatory functions. Although EPNs only infect insects, humans and insects share analogous immune reactions of the innate immune system. Characterized ESPs from H. bacteriophora have the capacity to down-regulate the production of antimicrobial peptides (AMPs), induced by insect host hemolymph during infection. In addition, P. luminesces produces lectins that decrease the production of reactive oxygen species (ROS) in human blood phagocytes. In this study, we optimize the production process of H. bacteriophora ESPs in infective juveniles (IJs), by getting rid of contamination and using a variety of materials that induce their production. The different activating materials used come from a variety of compounds from insect host Galleria mellonella, which we name as homogenate. Furthermore, we isolated these ESPs and analyzed their immunomodulatory functions in insects and humans. We confirmed that the contamination found in the production of ESPs was due to Gram-positive and Gram-negative bacteria, and that this contamination could be eliminated with kanamycin (50 mg/ml) and streptomycin/penicillin (10,000 U/ml). Moreover, the use of these antibiotics showed an increase in the protein concentration of ESPs. We did not detect any increase in the protein concentration of ESPs, by the addition or removal of 0,01 % NaClO, nor with activation or secretion times selected in this study. An increase in the protein concentration of ESPs was observed when using as activating material concentrated heat-inactivated homogenate. We analysed the effect of ESPs over the antimicrobial activity of hemolymph from G. mellonella, by viability of bioluminescent Escherichia coli. We could not conclude if ESPs impede the antimicrobial activity of hemolymph or served as nutrients for the bacteria, due to lack of statistical significance. Lastly, we decided to measure the effect of ESPs over the production of ROS in human blood, concluding that collected ESPs do not significantly affect this type of immune response. This study benefits the ongoing research of bioactive ESPs over the areas of pharmacology, biocontrol and human medicine.

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